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PNPLA3、Sort1基因多态性与酒精性肝病易理性的关系

发布时间:2019-10-12 15:06:17 作者:眼光如豆 审核编辑:本站小编 点击:下载该Word文档收藏本文

摘要目标 商量PNPLA3Sort1基因多态性与酒精性肝病易理性的关系。办法 拔取20171月至20183月在我院治疗的酒精性肝病患者110例(病例组),同时拔取经久大年夜量饮酒但未被诊断酒精性肝病患者100(无肝病嗜酒组)、安康自愿者200例(对比组),检测各组PNPLA3Sort1基因多态性。成果 PNPLA3基因rs738409位点检测出CCCGGG三种基因型,Sort1基因rs646776位点检测出CCTCTT三种基因型;病例组PNPLA3基因GG型和等位基因G的比例分布为23.64%45.45%,明显高于无肝病嗜酒组和对比组(p0.05);各组Sort1基因多态性分布差别比较无统计学意义(p0.05);病例组不合PNPLA3基因型患者TGTCHDL-CLDL-C比较差别无统计学意义(p0.05);病例组Sort1基因TT型患者TG为(1.61±0.30mmol/L,高于CC+CT型患者,而HDL-C为(1.80±0.65mmol/L,低于CC+CT型患者(p0.05)。结论 PNPLA3基因多态性与酒精性肝病易理性有必定关系,Sort1基因多态性与酒精性肝病易理性无明显关系,但与患者的血脂程度具有必定的相干性。

【关键词】 PNPLA3基因;Sort1基因;基因多态性;酒精性肝病;遗传易理性

Association of PNPLA3 and Sort1 gene polymorphisms with susceptibility to alcoholic liver disease

Lixiaofeizhanglipingguoyongsheng

1. Department of Infectious,Jiaozuo Third People's Hospital, Jiaozuo, Henan 454000;

2.Operation room, Jiaozuo People's Hospital, Jiaozuo, Henan, 454000

3.Jiaozuo Shanyang District CDC, Henan Jiaozuo, 454000

[Abstract]Objective: To investigate the association between PNPLA3 and Sort1 gene polymorphisms and susceptibility to alcoholic liver disease.Methods: 110 cases of alcoholic liver disease (case group) were selected from January 2017 to March 2018 in our hospital, 100 cases without alcoholic liver disease who had been drinking heavily for a long time (without liver disease alcoholism group) and 200 healthy volunteers (control group) were selected, PNPLA3 and Sort1 gene polymorphisms were detected in each group.Results:PNPLA3 gene rs738409 loci detected three genotypes of CC, CG and GG. Sort1 gene rs646776 loci detected three genotypes of CC, TC and TT; The proportions of PNPLA3 genotype GG and allele G in case group were 23.64% and 45.45%, which were significantly higher than those without liver disease alcoholism group and control group (P < 0.05); There was no significant difference in the distribution of Sort1 gene polymorphisms among each groups (P > 0.05); There were no significant difference in TG, TC, HDL-C and LDL-C in patients with different PNPLA3 genotypes (P > 0.05); The TG of Sort1 gene TT in case group was (1.61±0.30) mmol/L, higher than that of type CC+CT, and HDL-C was (1.80±0.65) mmol/L, lower than that of CC+CT type (P < 0.05).Conclusion:The polymorphism of PNPLA3 gene is related to the susceptibility of alcoholic liver disease, the polymorphism of Sort1 gene is not related to the susceptibility of alcoholic liver disease, but it may be related to the level of blood lipid in patients.

[Keywords] PNPLA3 gene; Sort1 gene; gene polymorphism; alcoholic liver disease; genetic susceptibility

 

酒精性肝病属于临床罕见的肝脏疾病,主如果经久大年夜量饮酒激起,近年来酒精性肝病的病发率出现降低的趋势,对患者的心思和心思产生严重的影响,今朝临床按照患者病情与病程将酒精性肝病分为酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化与酒精性肝硬化,有学者认为本病的产生同肝脏脂肪代谢存在关系,今朝对疾病产活力制方面研究较多[1]。有学者报导乙醇在摄取人体内90%以上经过过程肝脏停止代谢,而酒精代谢过程在不合人群中会表示出个别化的差别性,基因多态性的研究在临床愈来愈广泛,有研究发明patatin样磷脂酶3(patatin likephospholipase domain containing 3PNPLA3)基因的非同义序列变异在人体肝脏脂肪变性中发挥了重要感化,该基因编码的一种跨膜蛋白被证明在肝细胞膜中明显表达;Sort1则是脂质代谢调理基因,由Sort1编码分拣蛋白是载脂蛋白B100的受体,重要定位在高尔基体的细胞内蛋白,同人体的脂质代谢调理关系密切[2]。本研究经过过程不雅察PNPLA3Sort1基因多态性同酒精性肝病易理性之间的关系,为临床寻觅酒精性肝病产生的风险身分,以期为临床供给指导和根据,现报告请示以下。

 

1材料与办法

1.1普通材料 

拔取20171月至20183月在我院治疗的酒精性肝病患者110例(病例组),同时拔取经久大年夜量饮酒但未被诊断酒精性肝病患者100(无肝病嗜酒组)、安康自愿者200例(对比组),归入标准:(1)诊断符合《酒精性肝病诊疗指南》中的标准;(2)病例组和无肝病嗜酒组饮酒嗜酒5年,乙醇量:男性40g/d,女性20g/d;(3)对比组受试者不饮酒;(4)一切受试者知情赞成。清除标准:(1)归并有HAVHBV等肝炎病毒感染、药物性肝病、恶性肿瘤、本身免疫性疾病等;(2)已行肝移植手术者。各组受试者普通材料比较差别无统计学意义(p0.05),见表1

1 各组普通材料比较

组别

例数

/

年纪(岁)

乙醇量(g/d

饮酒时间(年)

对比组

200

190/10

50.41±6.46

-

- 

无肝病嗜酒组

100

95/5

49.25±7.15

64.42±12.24

14.25±2.24

病例组

110

107/3

51.03±8.22

65.58±13.30

14.65±2.30

F/c2


0.990

2.106

1.554

1.067

p


0.05

0.05

0.05

0.05

1.2实验办法

抽取患者血液提取DNA,取100μl血液参加离心管,参加PBSSolution100μl混匀,参加ProteinaseK20μl,参加Buffer CL200μl56℃水浴10min,参加污水乙醇混匀,置入搜集管中放置2min10000rpm离心1min,吸附置入搜集管,参加CW1Solution500μl,离心30s,弃掉落废液后参加CW2Solution500μl,离心30s弃掉落废液,将搜集管于12000rpm室温离心1min,离去CW2 Solution,将吸附柱放入一个新的离心管参加CE Buffer 50μl,静置3min,室温离心2min搜集DNA溶液。提取的DNA放于-20℃冰箱保存。全血基因组DNA抽提试剂盒由生物工程(上海)股分无限公司供给。

PNPLA3基因检测:停止PCR扩增反响,应用琼脂糖凝胶电泳对PCR产品停止剖断向干净烧瓶中参加50ml 5×TBE溶液,随后参加450ml蒸馏水,充分混勾制成0.5×TBE溶液,将1g琼脂糖参加烧瓶,将曾经加好试剂的烧瓶放入微波炉中,高温加热2min至烧瓶中液体沸腾,取出后待凝胶冷却到50℃阁下参加Ultra Power核酸染料摇摆混匀,静置3-5min。停止电泳反响,参加制备好的0.5×TBE溶液至电泳槽,参加5μl DNA MarkerPCR产品Loading Buffer混淆物,电压设置为1OOV 30min后取出,拿至紫外灯下剖断。

Sort1基因检测:取规格为1.5mlEP管中设备PCR master mixPCR引物由北京博淼生物科技无限公司供给,引物浓度为1μmol/L,保存于-20℃冰箱备用,在384孔板的每个加样孔中参加4μl PCR master mix,参加1μl模板DNA停止混匀,停止PCR扩增反响,在10μlPCR产品中参加5U SAP酶和2U Exonuclease I酶,恒温水浴1h75℃下灭活15min,连接反响后将连接产品稀释取0.5μl0.5μl Liz500 SIZE STANDARD9μlHi-Di混匀,变性后应用MALDI-TOF质谱仪分析。

1.3统计学处理

统计分析采取SPSS19.0软件,计量材料采取均数±标准差表示,多组间比较应用方差分析,两两比较采取LSD-t考验;计数材料比较应用c2考验;遗传均衡性考验采取Hardy-Weinberg考验。考验水准a=0.05

2成果

2.1PNPLA3Sort1基因多态性成果

PNPLA3基因rs738409位点检测出CCCGGG三种基因型,Sort1基因rs646776位点检测出CCTCTT三种基因型,各组PNPLA3Sort1基因多态性分布符合Hardy-Weinberg均衡定律。

2.2 各组PNPLA3Sort1基因多态性分布比较

病例组PNPLA3基因GG型和等位基因G的比例分布明显高于无肝病嗜酒组和对比组(c2=28.44512.834,36.64214.504p0.05),见表2;各组Sort1基因多态性分布差别比较无统计学意义(p0.05),见表3

2 各组PNPLA3基因多态性分布

组别

例数

基因型


等位基因

CC

CG

GG


C

G

对比组

200

12160.50

6532.50

147.00


30776.75

9323.25

无肝病嗜酒组

100

5454.00

3737.00

99.00


14572.50

5527.50

病例组

110

3632.73

4843.64

2623.64


12054.55

10045.45

c2


30.612


34.115

p


0.05


0.05

3 各组Sort1基因多态性分布比较

组别

例数

基因型


等位基因

CC

TC

TT


C

T

对比组

200

42.00

3819.00

15879.00


4611.50

35488.50

无肝病嗜酒组

100

33.00

2020.00

7777.00


26(13.00)

174(87.00)

病例组

110

21.82

1412.73

9485.45


18(8.18)

202(91.82)

c2


2.981


2.709

p


0.05


0.05

2.3 病例组各PNPLA3Sort1基因型血脂程度比较

病例组不合PNPLA3基因型患者TGTCHDL-CLDL-C比较差别无统计学意义(p0.05);病例组Sort1基因TT型患者TG高于CC+CT型患者,而HDL-C低于CC+CT型患者(p0.05)。见表4

4病例组各PNPLA3Sort1基因型血脂程度比较

基因型

例数

TGmmol/L

TCmmol/L

HDL-Cmmol/L

LDL-Cmmol/L

PNPLA3基因






CC

121

1.55±0.54

5.41±0.68

1.84±0.46

3.17±0.92

CG

65

1.57±0.41

5.38±0.70

1.82±0.41

3.18±0.90

GG

14

1.56±0.48

5.40±0.67

1.85±0.50

3.20±0.99

F


1.204

0.897

1.115

1.064

p


0.05

0.05

0.05

0.05

Sort1基因






CC

4

1.50±0.22

5.37±0.84

1.90±0.68

3.16±0.87

TC

38

1.51±0.21

5.40±0.91

1.89±0.71

3.19±0.90

TT

158

1.61±0.30ab

5.39±0.89

1.80±0.65ab

3.18±0.89

F


6.221

1.106

5.246

1.112

p


0.05

0.05

0.05

0.05

注:aCC型比较p0.05bTC型比较p0.05

3评论辩论

酒精性肝病属于临床罕见的肝毁伤类型之一,主如果由于经久酗酒招致,会带来社会不稳定、家庭抵触等多种风险,酒精关于肝脏的伤害在及时戒酒后一段时间内仍会持续停顿,今朝关于本病的病发机制研究尚不清楚,是以有效的治疗办法不多,重要以肝功能的保护为主[3-4]。今朝认为酒精性肝病主如果遗传身分与情况身分合营感化成果,长时间大年夜量酒精摄取、高脂肪高热量饮食均能够形成疾病产生,近年来随着全基因组接洽关系研究发明PNPLA3基因和Sort1基因均能够和多种疾病产生生长有关,然则传统的研究多半集中在肝癌、病毒性肝炎中,在酒精性肝病的研究报导较少[5]。有报导指出脂肪变性是酒精性肝毁伤的早期阶段,经过过程脂质过氧化反响和细胞因子激活会激起肝细胞的炎症反响,终究停顿为纤维化[6-7]。近年来全基因组接洽关系分析一向是重要的不雅察基因变更手段,经过过程测定特定物种不合个别间的基因来懂得基因变更情况,对肯定遗传和表型和基因和疾病的接洽关系性具有重要研究意义[8-9]。本研究拟在经过过程对PNPLA3基因和Sort1基因多态性格况和酒精性肝病易理性之间关系,以期为临床供给必定的根据。

PNPLA3patatin磷脂酶家族,编码基因在22号染色体长臂133亚带1次亚带,可以编码非渗出性蛋白,这一蛋白是481个氨基酸所构成的,具有非特异性酰基水解酶活性,具有高度水解序列,PNPLA3活性中间丝氨酸就在此序列,和天冬氨酸停止结合,这个结合的二元体就是发挥催化感化的关键部位[10]PNPLA3在人类各组织中均有广泛表达,而肝脏和脂肪组织表达最多,特别是产生变异后会形成肝细胞脂肪分化代谢变更,肝脏的脂肪聚积增多,促进脂肪肝的构成,并且还会降低甘油三酯在细胞间的运输动力,使得他们更轻易遭到脂质过氧化,进而招致氧化应激,对肝细胞形成毁伤和炎症[11];另外还可经过过程形成肝脏脂肪变性及肝细胞的炎症而对肝纤维化产生影响,肝细胞毁伤和炎性介质的释放会招致库普佛细胞二次活化,缩小年夜炎性反响进而招致肝细胞逝世亡,肝星状细胞活化,肝脏纤维法式榜样激活[12]。有学者研究发明PNPLA3的基因多态性同肝脏脂肪含量增多和肝脏纤维化程度密切相干。Stickel F等人研究德国两组人群rs738409位点的多态性,发明该位点多态性能够经过过程介导肝脏脂质堆积惹起酒精性肝病患者炎症反应的产生与停顿,发明PNPLA3 rs738409基因多态性与酒精性肝病的产生和停顿为肝硬化相干[13]

分拣蛋白1Sort1)属于一个新的脂质代谢调理基因,与低密度脂蛋白代谢相干,重要定位在跨高尔基体网状构造上,在溶酶体转运蛋白质的过程当中起到了重要的感化,Sort1基因重要包含在染色体1p13.3上,应用染色体基因图谱绘制的表达数量性状位点分析显示,Sort1主要等位基因C纯合子在肝脏中表达增高,然则主要等位基因纯合子在内脏脂肪中不表达,说清楚明了1p13.3区域具有肝脏特异性[14]。加拿大年夜学者研究发明,青少年人群中携带主要等位基因C的纯合子可以或许降低青少年人群中甘油三酯与极低密度脂蛋白程度[15]

本研究显示,PNPLA3基因rs738409位点检测出CCCGGG三种基因型,Sort1基因rs646776位点检测出CCTCTT三种基因型,酒精性肝病患者PNPLA3基因GG型和等位基因G的比例分布明显高于无肝病嗜酒组和对比组,解释PNPLA3基因GG型和等位基因G人群轻易产生酒精性肝病。然则酒精性肝病的产生同Sort1基因分布无相干性。然则在对酒精性肝病患者血脂程度同两种基因型分析发明,酒精性肝病患者不合PNPLA3基因型患者TGTCHDL-CLDL-C无差别,然则Sort1基因TT型患者TG高于CC+CT型患者,而HDL-C低于CC+CT型患者,解释Sort1基因TT型能够是酒精性肝病患者的保护基因。本研究优势在于从基因学层面分析了PNPLA3基因、Sort1基因同酒精性肝病的产生之间关系,展开了初步研究,供给了酒精性肝病遗传学研究的相干证据,有欲望从该基因关键分子动手发明更加敏感的、可信的生物学目标用于临床ALD病发风险猜想,并从遗传学角度解释酒精性肝病产生、生长的机制,为进一步的针对该基因靶向治疗供给实际根据。然则受限于实验时间、经费无限,本实验拔取样本数量较少,且未采取多中间结合实验,不克不及完全清除照应的抽样误差,还有待进一步深刻分析论证。

综上所述,PNPLA3基因多态性与酒精性肝病易理性有必定关系,Sort1基因多态性与酒精性肝病易理性无明显关系,但与患者血脂程度相干。

参考文献

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[4]李晖,郑丹,姜挺,等.非酒精性脂肪性肝病患者PNPLA3基因rs139051 C>T多态性分析[J].山东医药,201757(22)76-78

[5]梁国威,邵冬华,刘洁,等.PNPLA3基因rs738409检测办法的建立及其与非酒精性脂肪肝的相干性分析[J].中华考验医学杂志,201639(1)45-49

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[7]安佰全,姜曼,程钰婷,等.瘦素受体基因K109R多态性对非酒精性脂肪性肝病病发的影响及其与脂肪滋养蛋白3基因I148M多态性的交互感化[J].中华肝脏病杂志,201624(5)358-362

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[13]Stickel FBuch SLau Ket alGenetic variation in the PNPLA3 gene is associated with alcoholic liver injury in aucasians[J].Hepatology201153(1)86-95

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[15]Connors K EKarlos A EGnatiuk E Aet alSORT1 protective allele is associated with attenuated postprandial: lipaemia in young adults.[J]. Circulation Cardiovascular Genetics20147(5)576


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